Serological evidence of Rickettsia in horses from a semi-arid Brazilian region / Evidência sorológica de Rickettsia em cavalos da região semiárida do Brasil

Abstract Brazilian spotted fever (BSF) is a common tick-borne disease caused by Rickettsia rickettsii. Horses are the primary hosts of the main vector, Amblyomma sculptum, and are considered efficient sentinels for circulation of Rickettsia. Therefore, the aim of this study was to detect antibodies reactive to R. rickettsii antigens in horses from a non-endemic area in the north-central region of Bahia state, Brazil. Blood samples and ticks were collected from 70 horses from the municipalities of Senhor do Bonfim, Antônio Gonçalves, Pindobaçu, and Campo Formoso. The sera obtained were tested by an indirect immunofluorescence assay to detect anti-Rickettsia antibodies. Overall, 5.7% (4/70) of the horses reacted to R. rickettsii antigens. Ticks were collected from 18.6% (13/70) of the horses and were identified as A. sculptum and Dermacentor nitens. Despite being a non-endemic area, seropositive animals were identified in our study, suggesting circulation of rickettsial agents in the region. This is the first serological survey of this agent in horses from the north-central region of Bahia, and further studies are needed to understand the epidemiology of BSF in these locations.

Resumo A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma importante zoonose causada por Rickettsia rickettsii, sendo seu vetor o Amblyomma sculptum. Cavalos são os principais hospedeiros desse carrapato e considerados sentinelas eficientes para detectar a circulação de Rickettsia. O objetivo deste estudo foi detectar anticorpos reativos a antígenos de R. rickettsii em cavalos de uma área não-endêmica na região Centro-Norte da Bahia, Brasil. Foram coletadas amostras de sangue e carrapatos de 70 cavalos nos municípios de Senhor do Bonfim, Antônio Gonçalves, Pindobaçu e Campo Formoso. Os soros obtidos foram testados pela reação de imunofluorescência indireta para detectar anticorpos anti-Rickettsia. No geral, 5,7% (4/70) dos cavalos reagiram sorologicamente para antígenos de R. rickettsii. Os carrapatos foram coletados em 18,6% (13/70) dos cavalos e foram identificados como A. sculptum e Dermacentor nitens. Embora seja uma área não endêmica, foram observados animais soropositivos, sugerindo a circulação de riquétsias na região estudada. Este é o primeiro estudo de levantamento sorológico desse agente em cavalos do Centro-Norte da Bahia. São necessários mais estudos para compreender a epidemiologia da FMB nesses locais.

Detecção de anticorpos anti-Rickettsia rickettsii em cães residentes em área negligenciada no município de São Paulo, SP, Brasil / [Detection of anti-Rickettsia rickettsii antibodies in dogs living in a neglected area in São Paulo, SP, Brazil]

A febre maculosa brasileira (FMB), descrita inicialmente nos Estados Unidos como febre maculosa das Montanhas Rochosas, é uma antropozoonose relatada apenas no continente americano e causada pela bactéria Rickettsia rickettsii. No Brasil a transmissão ocorre sobretudo pela picada de carrapatos do gênero Amblyomma spp. A doença foi inicialmente descrita como de transmissão em áreas rurais e silvestres, no entanto áreas periurbanas e urbanas vêm apresentando casos, principalmente relacionados com a presença de humanos residindo em pequenos fragmentos de mata ciliar. O presente estudo teve por objetivo elucidar a dispersão da FMB nas proximidades dos reservatórios Guarapiranga e Billings, na cidade de São Paulo, SP. Para tanto, a presença de anticorpos anti-R. rickettsii, Rickettsia parkeri e Rickettsia bellii foi avaliada em cães atendidos nas campanhas de esterilização cirúrgica e residentes ao redor dos reservatórios. Foram coletadas amostras de 393 cães, e as amostras de soro foram analisadas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 1:64. Os títulos para R. rickettsii variaram de 256 a 4096, com positividade de 3,3% (13/393); para R. bellii, de 128 a 1024 e 4,1% (16/393) de positivos, e um único animal (0,25%) foi soropositivo para R. parkeri, com título de 128. Os achados permitem concluir que a região de estudo apresenta condições de se tornar uma possível área com casos de FMB, pois comporta fragmentação de Mata Atlântica, condições essas ideais para a manutenção do vetor do gênero Amblyomma já descrito na região, bem como para a presença da Rickettsia rickettsii circulante entre os cães, confirmada pela existência de anticorpos. Condutas referentes à conscientização da população por meio de trabalhos educacionais devem ser implantadas para a prevenção da doença na população da área.(AU)

Brazilian Spotted Fever (BSF), initially described in the United States as Rocky Mountain Spotted Fever, is an anthropozoonosis reported only in the Americas and caused by the bacterium Rickettsia rickettsii. In Brazil, transmission occurs mainly through tick bites of the genus Amblyomma spp. The disease was initially described as transmission of rural and wild areas; however, peri-urban and urban areas have been presenting cases, mainly related to the presence of humans residing in small fragments of riparian forest. The present study aimed to elucidate the dispersal of BSF near the Guarapiranga and Billings Reservoirs, in the city of São Paulo, SP. The presence of anti-R. rickettsii, Rickettsia parkeri and Rickettsia bellii antibodies were evaluated in dogs treated in surgical sterilization campaigns and residents around the Reservoirs. Samples were collected from 393 dogs and serum samples were analyzed by indirect immunofluorescence reaction (RIFI) with a cutoff of 1:64. The titles for R. rickettsii varied from 256 to 4096 with a positivity of 3.3% (13/393); for R. bellii from 128 to 1024 and 4.1% (16/393) of positive and a single animal (0.25%) was seropositive for R. parkeri with a titre of 128. The findings allow us to conclude that the study region has conditions to become a possible area with BSF cases, as it involves Atlantic Forest, ideal conditions for the maintenance of the vector of the genus Amblyomma already described in the region and the presence of circulating Rickettsia rickettsii among dogs, confirmed by the presence of antibodies. Conducts regarding the awareness of the population through educational work should be implemented to prevent the disease in the population of the area.(AU)

A febre maculosa brasileira e o discurso da mídia impressa: perspectivas de atores envolvidos / Brazilian spotted fever and the print media's discourse: perspectives from actors involved / La fiebre maculosa brasileña y el discurso de los medios impresos: perspectivas de los actores envueltos

A febre maculosa brasileira (FMB) é uma doença infecciosa com alta letalidade que mobiliza ações de prevenção e controle com grande impacto na opinião pública. A capivara é fundamental na epidemiologia da doença, servindo como dispersora do vetor infectado. Objetiva-se compreender e analisar o discurso da FMB entre representantes da sociedade, circulante em um meio de comunicação impresso do município de Campinas, São Paulo, Brasil. Partindo da análise exploratória dos dados e seguindo para a análise do discurso (AD), as discursividades foram observadas. Com diferentes ressonâncias, relacionavam-se aos óbitos pela doença e ao abate das capivaras, com preferência para alguns protagonistas do discurso e apagamento de outros sujeitos. Privilégios para divulgação de notícias parciais e sensacionalistas reforçaram a polarização sobre o tema. Concluiu-se que houve pouca contribuição para uma comunicação em saúde crítica e colaborativa, essencial para a consciência sanitária da população.(AU)

Brazilian Spotted Fever (BSF) is a highly lethal infectious disease that mobilizes prevention and control actions that have a large impact on public opinion. The capybara is fundamental in the epidemiology of the disease, as it serves as the spreader of the infected vector. The aim of this study is to understand and analyze the society representatives' discourse about BSF that circulates in a printed means of communication of the city of Campinas, State of São Paulo, Brazil. Starting with exploratory data analysis and moving on to discourse analysis, we investigated the discursivities: with different resonances, they were related to deaths caused by the disease and to the slaughter of capybaras. Preference was given to some protagonists of the discourse, while other subjects were obliterated. Dissemination of partial and sensational news strengthened the polarization about the theme. We concluded that there was a scarce contribution to a critical and collaborative communication in the area of health, essential for the population's sanitary awareness.(AU)

La fiebre maculosa brasileña (FMB) es una enfermedad infecciosa con alta letalidad que moviliza acciones de prevención y control con gran impacto en la opinión pública. El carpincho es fundamental en la epidemiología de la enfermedad, sirviendo como diseminador del vector infectado. El objetivo es comprender y analizar el discurso de la FMB entre representantes de la sociedad, circulante en un medio de comunicación impreso del municipio de Campinas, São Paulo, Brasil. Partiendo del análisis de exploración de los datos y continuando para el análisis del discurso, se observaron las discursividades. Con diferentes resonancias, se relacionaban a los fallecimientos por la enfermedad y a la matanza de los carpinchos. Preferencias para algunos protagonistas del discurso, apagándose otros sujetos. Privilegios para divulgación de noticias parciales y sensacionalistas reforzaron la polarización sobre el tema. Se concluyó que hubo poca contribución para una comunicación de salud crítica y colaborativa, esencial para la conciencia sanitaria de la población.(AU)

Spotted fever group rickettsial infection in dogs and their ticks from domestic-wildlife interface areas in southeastern Brazil / Infecção por rickettsias do Grupo da Febre Maculosa em cães e carrapatos de áreas de interface doméstico-silvestre no sudeste Brasileiro

Abstract Rickettsia rickettsii is the causative agent of Brazilian spotted fever (BSF), for which humans and dogs are both susceptible. Dogs are sentinels in serological surveys, however, canine disease is rarely reported. Therefore, we aimed to evaluate natural infection by spotted fever group (SFG) Rickettsia spp. in dogs and ticks collected from domiciles close to forest fragments, featuring domestic-wildlife interface areas. Samples from 115 dogs and 135 ixodids were assessed by polymerase chain reactions (PCR) targeting the gltA gene for Rickettsia spp. and the ompA gene for the SFG rickettsial species. One dog (0.87%; 1/115) was positive for R. rickettsii. This dog presented nonspecific laboratory and clinical abnormalities (thrombocytopenia, hyperproteinemia, lymph node enlargement, emaciation, anorexia, and lethargy). Rickettsia parkeri was identified in 2.96% (4/135) of the ticks (Amblyomma sculptum, A. aureolatum, and Rhipicephalus sanguineus). This study confirmed the presence of SFG bacteria in non-endemic and preserved locations, where domestic and wild populations interact. We reinforce the fact that the dog is susceptible to natural R. rickettsii infection. Although this is a rare finding, preventive measures should be taken against BSF in the studied areas. Finally, R. parkeri infection is possibly being demonstrated in A. sculptum for the first time.

Resumo Rickettsia rickettsii é o agente causador da Febre Maculosa Brasileira (FMB), doença na qual humanos e cães são susceptíveis. Os cães são sentinelas nos inquéritos sorológicos, contudo, a doença canina é raramente descrita. Assim sendo, objetivou-se avaliar a infecção natural por Rickettsia spp. do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em cães e carrapatos obtidos de domicílios próximos a fragmentos de mata, caracterizando áreas de interface doméstico-silvestre. Amostras de 115 cães e 135 ixodídeos foram avaliadas pela reação em cadeia da polimerase (PCR) tendo como alvo o gene gltA de Rickettsia spp. e o gene ompA das espécies do GFM. Um cão (0,87%; 1/115) foi positivo para R. rickettsii. Este animal apresentou alterações clínicas e laboratoriais inespecíficas (trombocitopenia, hiperproteinemia, linfonodos edemaciados, emagrecimento, anorexia e letargia). Rickettsia parkeri foi identificada em 2,96% (4/135) dos carrapatos (Amblyomma sculptum, A. aureolatum e Rhipicephalus sanguineus). Este estudo confirmou a presença de bactérias do GFM em locais preservados e não endêmicos, onde populações domésticas e silvestres interagem. Reforçamos o fato do cão ser susceptível à infecção natural por R. rickettsii. Embora este seja um achado raro, medidas preventivas devem ser tomadas contra a FMB nas áreas estudadas. Em última análise, a infecção por R. parkeri possivelmente está sendo demonstrada pela primeira vez em A. sculptum.

Serosurvey of Rickettsia spp. in cats from a Brazilian spotted fever-endemic area / Soroprevalência de Rickettsia spp. em gatos de uma área endêmica para a Febre Maculosa Brasileira

Abstract Rickettsia spp. bacteria are responsible for tick-borne diseases worldwide, mostly maintained by rickettsial amplifiers capybaras in Brazilian endemic areas. The campus of the University of São Paulo, in southeastern Brazil, is an area endemic for Brazilian spotted fever (BSF), with high density of capybaras and Amblyomma spp., along with confirmed human cases. Besides capybaras, the university has also an in-campus high population of sheltered and free-roaming cats. Accordingly, the aim of this study was to determine the prevalence and characteristics associated with Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri and Rickettsia felis exposure among cats in a BSF-endemic area. Out of 51 cats sampled, 23/35 shelter (65.7%) and 5/16 free-roaming (31.2%) were positive (titers ≥ 64) for at least one Rickettsia species. Ticks species were present in 3/16 free-roaming cats (18.8%), consisting of Amblyomma spp., nymphs of Amblyomma sculptum and adult Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Despite sharing the capybaras environment, the seropositivity among the free-roaming and shelter cats was lower than owned cats in other endemic areas. Whether equally or less exposed to rickettsial infection, compared with owned cats in endemic areas, free-roaming and shelter cats may be used as environmental sentinels for human exposure to rickettsiae in such areas.

Resumo Espécies de Rickettsia têm sido responsáveis por doenças transmitidas por carrapatos no mundo, a maioria mantida por hospedeiros amplificadores, como as capivaras em áreas endêmicas no Brasil. A Universidade de São Paulo, em Piracicaba, no sudeste do Brasil, é uma área endêmica para a Febre Maculosa Brasileira (FMB), com alta densidade de capivaras e Amblyomma spp., e com casos humanos confirmados. Além de capivaras, a universidade também possui gatos em um abrigo e de vida livre. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar a prevalência e as características associadas com exposição à Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri e Rickettsia felis em gatos de área endêmica para a FMB. Dos 51 gatos amostrados, 23/35 (65,7%) do abrigo e 5/16 (31,2%) de vida livre foram positivos (títulos ≥ 64) para pelo menos uma Rickettsia spp. Carrapatos estiveram presentes em 3/16 (18,8%) gatos de vida livre, representados por Amblyomma spp., ninfas de Amblyomma sculptum e adultos de Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Apesar de compartilharem o ambiente com capivaras, os gatos amostrados foram igualmente ou menos expostos à infecção riquetsial do que os gatos com proprietário em outras áreas endêmicas, podendo ser usados como sentinelas para exposição humana à riquétsias nessas áreas.

Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica / Detection of immunoreactive proteins of Rickettsia sp. Atlantic Forest strain

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.(AU)

Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.(AU)

Urbanization of Brazilian spotted fever in a municipality of the southeastern region: epidemiology and spatial distribution / Urbanização da febre maculosa brasileira em município da região Sudeste: epidemiologia e distribuição espacial

Brazilian spotted fever is an emerging zoonosis notified mainly in the Southeast of Brazil, especially due to its high level of lethality.

Primeiro caso de febre maculosa brasileira branda associada à artrite / First report of mild Brazilian spotted fever associated to arthritis

Descrevemos o primeiro caso brasileiro de Riquetsiose branda, agravada por monoartrite em joelho, em adulto jovem picado por carrapato na perna esquerda na região de Camburi, localizada no município de São Sebastião, sul da região costeira do estado de São Paulo, Mata Atlântica, Brasil. O paciente apresentou uma escara de inoculação no local da picada do carrapato, associada ao aumento ganglionar em virilha esquerda, febre, poliartralgia, cefaleia e erupção macular. Vinte dias após o episódio da picada de carrapato, o paciente apresentou monoartrite em joelho direito. O diagnóstico de Riquetsiose branda foi estabelecido pela análise imunológica sequencial em amostras de soro e líquido sinovial, tendo sido empregada a técnica de imunofluorescência (IF) indireta para anticorpos reativos contra Rickettsia parkeri e Rickettsia rickettsii. A Riquetsiose branda é uma zoonose emergente, que deve ser investigada pelos médicos, incluindo reumatologistas, em pacientes que apresentem erupção macular, febre e, eventualmente, artrite, após visita ao sul da região costeira da Mata Atlântica no Brasil.

We describe the first Brazilian case of mild Rickettsiosis, complicated by knee monoarthritis, in young adult bitten by a tick on his left leg in Camburi zone, located in São Sebastião municipality, southern coastal region of the State of São Paulo, in the Atlantic rainforest region, Brazil. The patient developed inoculation eschar at the tick bite site associated with enlarged lymph nodes in the left groin, fever, polyarthralgia, headache and macular rash. Twenty days after tick bite episode, he displayed monoarthritis in his right knee. The diagnosis of mild Rickettsiosis was established by sequential immunological analysis in serum and synovial fluid, using the indirect immunofluorescence (IF) assay for antibodies reactive with Rickettsia parkeri and Rickettsia rickettsii. The mild Rickettsiosis is an emerging zoonosis, that must be investigated by physicians, including rheumatologists, in patients that present macular rash, fever and eventually arthritis, after visiting the southern coastal Atlantic rainforest region in Brazil.

Antibodies against rickettsiae from spotted fever groups in horses from two mesoregions in the state of Santa Catarina, Brazil / Anticorpos contra rickettsias do grupo da febre maculosa em equinos de duas mesorregiões de Santa Catarina, Brasil

Bacteria of the Rickettsia genus are agents of Brazilian Spotted Fever (BSF), a zoonotic disease which is difficult to diagnose, evolves quickly and can result in death. Antibodies against Rickettsia spp. in horses were studied, by means of Indirect Immunofluorescence Assay (IFAT ≥64), in 150 blood samples taken from animals in two Santa Catarina mesoregions (Planalto Serrano and Vale do Itajaí). The overall occurrence of Rickettsia spp. antibodies in horses was 18.66%, with cross-reactivity occurring in all positive samples for at least two of the species tested. Separately, according to the species, 25 (16.66%) samples were positive for R. rickettsii, 15 (10%) for R. parkeri, 22 (14.66%) for R. amblyommii, 23 (15.33%) for R. rhipicephali, 16 (10.66%) for R. bellii and 19 (12.66%) for R. felis. Only two animals resulted in a conclusive serodiagnosis, one for R. bellii and the other for R. rickettsii, at maximum dilutions of 1:4096 and 1:512, respectively. The occurrence of antibodies against Rickettsia spp. in horses from two mesoregions in the state of Santa Catarina indicates the movement of BSF agents in these sentinel animals and confirms the importance of studying spotted fever in the state of Santa Catarina.

Bactérias do gênero Rickettsia são agentes da Febre Maculosa Brasileira (FMB), uma doença zoonótica, de difícil diagnóstico, rápida evolução e que pode levar o indivíduo à morte. Anticorpos contra Rickettsia spp. em equinos foram pesquisados, por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI≥64), em 150 amostras de sangue colhidas de animais em duas mesorregiões de Santa Catarina (Planalto Serrano e Vale do Itajaí). A ocorrência de anticorpos contra Rickettsia spp. observada em equinos de duas mesorregiões de Santa Catarina foi de 18,66%, ocorrendo reações cruzadas em todas as amostras positivas para, no mínimo, duas das espécies testadas. Isoladamente, de acordo com as espécies, 25 (16,66%) amostras foram positivas para R. rickettsii, 15 (10%) para R. parkeri, 22 (14,66%) para R. amblyommii, 23 (15,33%) para R. rhipicephali, 16 (10,66%) para R. bellii e 19 (12,66%) para R. felis. Somente dois animais resultaram em um sorodiagnóstico conclusivo, um para Rickettsia bellii e outro para R. rickettsii, nas diluições máximas de 1:4096 e 1:512, respectivamente. A ocorrência de anticorpos contra Rickettsia spp. em equinos de duas mesorregiões de Santa Catarina indica a circulação de agentes da FMB nestes animais sentinela e ratificam a importância do estudo da febre maculosa no estado de Santa Catarina.

Rickettsia species infecting Amblyomma ticks from an area endemic for Brazilian spotted fever in Brazil / Rickettsia infectando carrapatos Amblyomma de uma área endêmica para febre maculosa Brasileira no Brasil

This study reports rickettsial infection in Amblyomma cajennense and Amblyomma dubitatum ticks collected in an area of the state of Minas Gerais, Brazil, where Brazilian spotted fever is considered endemic. For this purpose, 400 adults of A. cajenennse and 200 adults of A. dubitatum, plus 2,000 larvae and 2,000 nymphs of Amblyomma spp. were collected from horses and from the vegetation. The ticks were tested for rickettsial infection through polymerase chain reaction (PCR) protocols targeting portions of three rickettsial genes (gltA, ompA, and ompB). Only two free-living A. cajennense adult ticks, and four pools of free-living Amblyomma spp. nymphs were shown to contain rickettsial DNA. PCR products from the two A. cajennense adult ticks were shown to be identical to corresponding sequences of the Rickettsia rickettsii strain Sheila Smith. DNA sequences of gltA-PCR products of the four nymph pools of Amblyomma spp. revealed a new genotype, which was shown to be closest (99.4 percent) to the corresponding sequence of Rickettsia tamurae. Our findings of two R. rickettsii-infected A. cajennense ticks corroborate the endemic status of the study area, where human cases of BSF were reported recently. In addition, we report for the first time a new Rickettsia genotype in Brazil.

Este trabalho relata infecção por Rickettsia em carrapatos Amblyomma cajennense e Amblyomma dubitatum, colhidos numa área do Estado de Minas Gerais, onde a febre maculosa brasileira (FMB) é considerada endêmica. Para esse estudo, 400 adultos de A. cajennense, 200 adultos de A. dubitatum, 2.000 larvas e 2.000 ninfas de Amblyomma spp. foram colhidas de equinos e da vegetação. Os carrapatos foram testados para infecção por rickettsia através de reação em cadeia pela polimerase (PCR) direcionada a fragmentos de três genes de rickettsia (gltA, ompA, e ompB). Apenas 2 A. cajennense adultos de vida livre, e 4 grupos de ninfas de Amblyomma spp. continham DNA de rickettsia. Os produtos de PCR dos dois adultos de A. cajennense foram idênticos às sequências correspondentes de Rickettsia rickettsii cepa Sheila Smith. Sequências de DNA dos produtos provenientes dos quatro grupos de ninfas de Amblyomma spp. revelaram um novo genótipo, próximo (99,4 por cento) à sequência correspondente de Rickettsia tamurae. Neste trabalho foram achados 2 carrapatos A. cajennense infectados por R. rickettsii que corroboram o caráter endêmico da área de estudo, em que casos de FMB ocorreram recentemente. Em adição, foi reportado, pela primeira vez, um novo genótipo de Rickettsia no Brasil.

Fatal Brazilian spotless fever caused by Rickettsia rickettsii in a dark-skinned patient / Febre maculosa brasileira sem exantema causada por Rickettsia rickettsii em um paciente de cor negra

Brazilian spotted fever (BSF) is the most important and frequent rickettsial disease in Brazil. A fatal case of BSF is reported in a 32-year-old black man, who died of irreversible shock after five days of fever, severe headache and abdominal pain with no rash. Spleen, kidney and heart samples collected at autopsy were positive for Rickettsia rickettsii by PCR and sequencing. The authors emphasize the need for a high index of diagnostic suspicion for spotted fever in black patients. Absence of a skin rash should not dissuade clinicians from considering the possibility of BSF and initiating empirical therapy.

Febre maculosa brasileira (FMB) é a mais importante e frequente doença rickettsial no Brasil. Relatamos um caso fatal de FMB em um homem negro de 32 anos de idade que morreu de choque irreversível após cinco dias de febre, cefaléia intensa, dor abdominal, e sem evidência de exantema. Amostras de baço, rim e coração coletadas na necropsia foram positivas para Rickettsia rickettsii por PCR e sequenciamento. Os autores ressaltam a necessidade de um alto índice de suspeita diagnóstica para febre maculosa em pacientes negros. Ausência de exantema não deve dissuadir os clínicos de considerar a possibilidade de FMB e iniciar a terapêutica empírica.

Serological survey of Rickettsia sp. in horses and dogs in an non-endemic area in Brazil / Identificação sorológica de Rickettsia sp. em equinos e cães de área não endêmica no Brasil

Brazilian Spotted Fever (BSF) is a lethal rickettsiosis in humans caused by the bacteria Rickettsia rickettsii, and is endemic in some areas of Brazil. Horses and dogs are part of the disease's life cycle and they may also serve as sentinel animals in epidemiological studies. The first human BSF case in the State of Paraná was reported in 2005. The present study was conducted in the municipality of Almirante Tamandaré, where no previous case of BSF was reported. Serum samples were collected from 71 horses and 20 dogs from nine properties in the area. Ticks were also collected from these animals. All farmers completed a questionnaire about their knowledge of BSF and animal health management. Serum samples were analyzed by indirect immunofluorescent-antibody assay (IFA) using R. rickettsii and R. parkeri as antigens. Ticks were analyzed by PCR for Rickettsia sp., and all of them were PCR-negative. Six horses (8.45 percent) and 4 dogs (20 percent) were identified as seropositive. Farmers were not aware of the correlation between the presence of ticks and risk of BSF. Although a non-endemic area, Almirante Tamandaré is a vulnerable environment for BSF and effective tick control measures are required.

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma riquetsiose letal para humanos, causada pela bactéria Rickettsia rickettsii, e é endêmica em algumas regiões brasileiras. Equinos e cães podem participar do ciclo da doença e podem também servir como sentinelas em estudos epidemiológicos. O primeiro caso humano relatado no Estado do Paraná ocorreu em 2005. O presente estudo foi realizado no município de Almirante Tamandaré, região onde não há relatos de casos de FMB. Foram coletadas amostras de sangue de 71 cavalos e 20 cães em nove propriedades rurais na região. Carrapatos também foram colhidos dos animais. Todos os proprietários responderam a um questionário sobre o manejo sanitário dos animais e o conhecimento a respeito da FMB. As amostras de soro foram processadas pela técnica de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), utilizando-se os antígenos de R. rickettsii e R. parkeri. Os carrapatos foram analisados por PCR para Rickettsia sp. e todos foram negativos. Seis cavalos (8,45 por cento) e 4 cães (20 por cento) foram identificados como soropositivos. Todos os proprietários desconheciam a relação de carrapatos com a FMB. Embora considerada uma área não endêmica, Almirante Tamandaré é um ambiente vulnerável à FMB e um controle eficiente de carrapatos deve ser implementado.

Seroprevalence of Rickettsia bellii and Rickettsia felis in dogs, São José dos Pinhais, State of Paraná, Brazil / Soroprevalência de Rickettsia bellii e Rickettsia felis em cães, São José dos Pinhais, Paraná, Brasil

Brazilian spotted fever (BSF) is a vector-borne zoonosis caused by Rickettsia rickettsii bacteria. Dogs can be host sentinels for this bacterium. The aim of the study was to determine the presence of antibodies against Rickettsia spp. in dogs from the city of São José dos Pinhais, State of Paraná, Southern Brazil, where a human case of BSF was first reported in the state. Between February 2006 and July 2007, serum samples from 364 dogs were collected and tested at 1:64 dilutions by indirect immunofluorescence assay (IFA) against R. rickettsii and R. parkeri. All sera that reacted at least to one of Rickettsia species were tested against the six main Rickettsia species identified in Brazil: R. rickettsii, R. parkeri, R. bellii, R. rhipicephali, R. amblyommii and R. felis. Sixteen samples (4.4 percent) reacted to at least one Rickettsia species. Among positive animals, two dogs (15.5 percent) showed suggestive titers for R. bellii exposure. One sample had a homologous reaction to R. felis, a confirmed human pathogen. Although Rickettsia spp. circulation in dogs in the area studied may be considered at low prevalence, suggesting low risk of human infection, the present data demonstrate for the first time the exposure of dogs to R. bellii and R. felis in Southern Brazil.

A febre maculosa brasileira (FMB) é uma zoonose veiculada por carrapatos e causada pela bactéria Rickettsia rickettsii, podendo os cães ser hospedeiros sentinelas para essa bactéria. O objetivo do estudo foi determinar a presença de anticorpos contra Rickettsia spp. em cães de São José dos Pinhais, estado do Paraná, Sul do Brasil. Entre fevereiro de 2006 e julho de 2007, amostras séricas de 364 cães foram coletadas e testadas na diluição de 1:64 por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) contra R. rickettsii e R. parkeri. Todos os soros reagentes para pelo menos uma espécie de Rickettsia foram testados contra as seis principais espécies de Rickettsia identificadas no Brasil: R. rickettsii, R. parkeri, R. bellii, R. rhipicephali, R. amblyommii e R. felis. Dezesseis amostras (4,4 por cento) reagiram para pelo menos uma espécie de Rickettsia. Dos animais positivos, dois cães (15,5 por cento) apresentaram títulos sugestivos de exposição a R. bellii. Uma amostra apresentou reação homóloga frente à R. felis, um agente patogênico confirmado para seres humanos. Muito embora os resultados demonstrem uma baixa prevalência de Rickettsia spp. em cães, sugerindo um baixo risco de infecção humana, este estudo relatou pela primeira vez a evidência de exposição a R. bellii e R. felis em cães no Sul do Brasil.

Serosurvey of antibodies against spotted fever group Rickettsia spp. in horse farms in Northern Paraná, Brazil / Soroprevalência de anticorpos contra Rickettsia spp. do grupo febre maculosa em equinos de haras no Norte do Paraná, Brasil

Brazilian spotted fever (BSF) is an emerging disease most likely caused by Rickettsia rickettsii. The objective of the present study was to estimate the seroprevalence of BSF rickettsia infections in equines from six horse farms located in Londrina County, Paraná, Southern Brazil. Six owners of horse farms situated in Cambé, Santa Fé, Guaraci and Londrina municipalities participated in the study. All farms were located in areas where BSF has not been reported. A total of 273 horses were sampled and their sera were tested by indirect Immunofluorescence assay (IFA) using R. rickettsii and R. parkeri antigens. Titers equal to and greater than 64 were considered positive. Of 273 sera tested, 15 (5.5 percent) reacted to R. rickettsii and 5 (1.8 percent) to R. parkeri. Five out of the six farms studied revealed seropositive animals and seropositivity rate ranged from 0 to 13 percent. The titers ranged from 64 to 512, and four samples had a titer of 512. Nine animals reacted to R. rickettsii with titers four-fold higher than those for R. parkeri. These results suggest that horses in Northern Paraná may have been exposed to rickettsiae identical or closely related to R. rickettsii.

Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença emergente, sendo Rickettsia rickettsii o seu principal agente etiológico. O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência de rickettsia do grupo da febre maculosa em equinos de seis haras localizados nos municípios de Cambé, Santa Fé, Guaraci e Londrina. As propriedades eram localizadas na região Norte do Paraná onde casos de FMB ainda não foram diagnosticados. Foram colhidas amostras de sangue de 273 equinos, e os soros foram testados pela RIFI, usando R. rickettsii e R. parkeri como antígenos, considerando-se como positivos títulos >64. Entre 273 soros, 15 (5,5 por cento) reagiram contra R. rickettsii e 5 (1,8 por cento) para R. parkeri. Cinco de seis haras estudados tinham animais reativos, e a taxa de sororreatividade variou de 0 a 13 por cento. Os títulos variaram de 64 para 512, e três amostras apresentaram título de 512. Nove animais reagiram para R. rickettsii com títulos quatro vezes maiores que para R. parkeri. Esses resultados sugerem que equinos no Norte do Estado do Paraná, Brasil, podem ter sido expostos a uma rickettsia idêntica ou muito próxima a R. rickettsii.

Brazilian spotted fever in cart horses in a non-endemic area in Southern Brazil / Febre maculosa brasileira em cavalo de carroceiro em área não-endêmica no Sul do Brasil

Brazilian Spotted Fever (BSF) is an often fatal zoonosis caused by the obligate intracellular bacterium Rickettsia rickettsii. The disease is generally transmitted to humans by Amblyomma spp. ticks. Serological evidence of past infection by R. rickettsii has been reported in horses, but the pathogenicity of R. rickettsii in horses remains unknown. Cart horses are still widely used in urban and urban fringe areas in Brazil, and these animals may constitute suitable sentinels for BSF human in these areas, for example, in Sao Jose dos Pinhais, where the first BSF human case in the state of Parana was diagnosed. Serum samples were randomly obtained from 75 cart horses between April 2005 and June 2006 and were tested by means of the indirect immunofluorescence assay (IFA) for antibodies against rickettsia of the spotted fever group. A total of 9.33 percent of the animals were considered positive, with titers ranging from 64 to 1,024. These results indicate the presence of the agent in such areas, although at low rates.

A febre maculosa brasileira (FMB) é uma zoonose, muitas vezes fatal, causada pela bactéria intracelular obrigatória Rickettsia rickettsii. A doença é transmitida para humanos pelo carrapato Amblyomma spp. Sorologia positiva por R. rickettsii foi relatada em cavalos, entretanto a patogenia de R. rickettsii em cavalos é desconhecida. Cavalos de carroceiros ainda são largamente utilizados em áreas urbanas e peri-urbanas no Brasil e estes animais podem representar sentinelas ideais para FMB nestas áreas, como exemplo, São José dos Pinhais, onde o primeiro caso humano de FMB foi descrita no Paraná. Amostras de soro foram obtidas aleatoriamente de 75 cavalos de carroceiros entre abril de 2005 e junho de 2006 e testados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) com anticorpos contra riquétsias do grupo da febre maculosa. Um total de 9,33 por cento dos animais foi considerado positivo, com títulos entre 64 e 1.024. Estes resultados indicam a presença do agente na área de estudo, embora em nível reduzido.

Febre maculosa brasileira: avaliação comparativa das metodologias de imunofluorescência indireta (IFI) e reação em cadeia pela polimerase (PCR) em amostras de pacientes provenientes de áreas endêmicas do Estado de São Paulo / Brazilian spotted fever: comparative evaluation of indirect immunofluorescence assay (IFA) and polymerase chain reaction (PCR) methology in human serum samples from endemic areas of São Paulo State

As aplicações da reação em cadeia pela polimerase (Nested PCR) foram avaliadas em comparação com a pesquisa de anticorpos e isolamento bacteriano, para o diagnóstico de casos fatais com suspeita de riquetsioses do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em amostras de soro. A PCR foi baseada na especificidade dos iniciadores derivados de uma região gênica conservada que codifica um antígeno de 17-kDa (htrA). Amostras de soro de 50 casos fatais suspeitos de riquetsioses do GFM foram testadas através da Imunofluorescência Indireta (IFI) para pesquisa de IgG e IgM e Nested PCR após extração do DNA com kit específico para extração de soro. O isolamento bacteriano foi realizado quando foram encaminhadas amostras adequadas para o exame. O fragmento específico de riquétsias GFM foi detectado em 40% (20/50) dos soros testados em comparação com 22% (11/50) detectados pelos métodos sorologia e isolamento bacteriano. Os produtos amplificados foram confirmados pela análise do sequenciamento de fragmentos de DNA apresentando 100% de identidade com R. rickettsii e com Grupo da Febre Maculosa. Os resultados obtidos indicam que a utilização da Nested PCR em amostras de soro aumenta a sensibilidade para o diagnóstico da FM em casos fatais com suspeita clínica da doença, sendo indicada sua aplicação em complemento à sorologia e ao isolamento.

Febre maculosa brasileira: avaliação comparativa das metodologias de imunofluorescência indireta (IFI) e reação em cadeia pela polimerase (PCR) em amostras de pacientes provenientes de áreas endêmicas do Estado de São Paulo / Brazilian spotted fever: comparative evaluation of indirect immunofluorescence assay (IFA) and polymerase chain reaction (PCR) methology in human serum samples form endemic areas of São Paulo State

As aplicações da reação em cadeia pela polimerase (Nested PCR) foram avaliadas em comparação com a pesquisa de anticorpos e isolamento bacteriano, para o diagnóstico de casos fatais com suspeita de riquetsioses do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em amostras de soro. A PCR foi baseada na especificidade dos iniciadores derivados de uma região gênica conservada que codifica um antígeno de 17-kDa (htrA). Amostras de soro de 50 casos fatais suspeitos de riquetsioses do GFM foram testadas através da Imunofluorescência Indireta (IFI) para pesquisa de IgG e IgM e Nested PCR após extração do DNA com kit específico para extração de soro. O isolamento bacteriano foi realizado quando foram encaminhadas amostras adequadas para o exame. O fragmento específico de riquétsias GFM foi detectado em 40% (20/50) dos soros testados em comparação com 22%(11/50) detectados pelos métodos sorologia e isolamento bacteriano. Os produtos amplificados foram confirmados pela análise do sequenciamento de fragmentos de DNA apresentando 100% de identidade com R. rickettsii e com Grupo da Febre Maculosa. Os resultados obtidos indicam que a utilização da Nested PCR em amostras de soro aumenta a sensibilidade para o diagnóstico da FM em casos fatais com suspeita clínica da doença, sendo indicada sua aplicação em complemento à sorologia e ao isolamento.

Febre Maculosa Brasileira: avaliação comparativa das metodologias de imunofluorescência indireta (IFI) e reação em cadeia pela polimerase (PCR) em amostras de pacientes provenientes de áreas endêmicas do Estado de São Paulo / Brazilian Spotted Fever: Comparative evaluation of Indirect Immunofluorescence (IFI) and Polymerase Chain Reaction (PCR) methodologies in samples from patients from endemic areas of the State of São Paulo

As aplicações da reação em cadeia pela polimerase (Nested PCR) foram avaliadas em comparação com a pesquisa de anticorpos e isolamento bacteriano, para o diagnóstico de casos fatais com suspeita de riquetsioses do Grupo da Febre maculosa (GFM) em amostras de soro. A PCR foi baseada na especificidade dos indicadores derivados de uma região gênica conservada que codifica um antígeno de 17-kDa (htrA). Amostras de soro de 50 casos fatais suspeitos de riquetsioses do GFM foram testadas através da imunofluorescência indireta (IFI) para a pesquisa de IgG e IgM e Nested PCR após extração do DNA com kit específico para extração de soro. O isolamento bacteriano foi realizado quando foram encaminhadas amostras adequadas para exame. O fragmento específico de riquétsias GFM foi detectado em 40% (20/50) dos soros testados em comparação com 22% (11/50) detectados pelos métodos sorologia e isolamento bacteriano. Os produtos amplificados foram confirmados pela análise do sequenciamento de fragmentos de DNA apresentando 100% de identidade com R. rickettsii e com Grupo da Febre Maculosa. Os resultados obtidos indicam que a utilização da Nested PCR em amostras de soro aumenta a sensibilidade para o diagnóstico da FM em casos fatais com suspeita clínica da doença, sendo indicada sua aplicação em complemento à sorologia e ao isolamento...

First identification of natural infection of Rickettsia rickettsii in the Rhipicephalus sanguineus tick, in the State of Rio de Janeiro / Primeira identificação de infecção natural por Rickettsia rickettsii no carrapato Rhipicephalus sanguineus no Rio de Janeiro

The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonotic disease caused by Rickettsia rickettsii and transmitted by ticks of the genus Amblyomma, more frequently, Amblyomma cajennense. The aim of this paper was to report the first molecular detection of R. rickettsii on R. sanguineus naturally infected in Rio de Janeiro, Brazil. Ticks were collected from dogs in a rural region of Resende municipality, Rio de Janeiro State, Brazil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), where occurred five human cases of BSF in 2006. The ticks were identified under a stereoscopic microscope and separated in pools by stages, species and sex. DNA extraction was carried out using QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN®). The DNA was submitted to PCR amplification using 04 set of primers: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa protein-encoding gene, 246bp) and RpCS.877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). PCR products were separated by electrophoresis on 1 percent agarose gels and visualized under ultraviolet light with ethidium bromide. PCR products of the expected sizes were purified by QIAquick® and sequenced by ABI PRISM®. The generated nucleotide sequences were edited with using Bioedit® software and compared with the corresponding homologous sequences available through GenBank, using Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). It was confirmed R. rickettsii by sequencing of the material (GenBank FJ356230). The molecular characterization of R. rickettsii in the tick R. sanguineus emphasizes the role of dogs as carriers of ticks from the environment to home. Moreover, this result suggests that there is a considerable chance for active participation of R. sanguineus as one of tick species in the transmission of R. ricketsii to human being in the Brazilian territory.

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose causada por Rickettsia rickettsii e transmitida por carrapatos do gênero Amblyomma, mais freqüentemente pela espécie Amblyomma cajennense. Este trabalho tem como objetivo relatar a primeira detecção molecular de R. rickettsii em Rhipicephalus sanguineus naturalmente infectado no Rio de Janeiro, Brasil. Carrapatos foram coletados de cães, procedentes de uma região rural do município de Resende, estado do Rio de Janeiro, Brasil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), onde ocorreram cinco casos humanos de FMB em 2006. Todos os carrapatos foram identificados segundo chave dicotômica, utilizando-se lupa estereoscópica e separados de acordo com estágio, espécie e sexo. Para a extração de DNA utilizou-se o kit comercial QIAamp DNA (QIAGEN ®). O DNA foi submetido à técnica de PCR utilizando 04 conjuntos de iniciadores para a amplificação dos genes: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa gene que codifica a proteína, 246bp) e RPCs .877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). Os produtos da PCR foram separados por eletroforese em gel agarose 1 por cento corados com brometo de etídio e visualizados sob luz ultravioleta e, aqueles que apresentaram bandas amplificadas foram purificados utilizando-se o kit comercial QIAquick ® e seqüenciados pelo ABI PRISM®. As seqüências nucleotídicas foram geradas usando Bioedit®, editado em software e comparados os correspondentes homólogos com as sequências disponíveis através GenBank, utilizando Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Confirmou-se R. rickettsii (GenBank FJ356230) no seqüenciamento de apenas um espécime, adulto de carrapato R. sanguineus. A caracterização molecular de R. rickettsii em exemplar de carrapato R. sanguineus confirma que esta espécie pode ter importante papel na transmissão de R. rickettsii para humanos no território brasileiro.